АЛКОТЕСТ

для медицинского применения

АЛКОТЕСТ набор реактивов

Назначение.

Набор используется для количественного анализа этанола в биологических жидкостях (цельной крови, плазме, сыворотке, слюне и моче) и предназначен для использования в клинико-диагностической и научно-исследовательской практике, а также судмедэкспертизе в качестве средства первичного скрининга проб.

Набор пригоден для определения этанола в лекарственных препаратах, пищевых продуктах и бродильных средах.

Набор рассчитан на 100 анализов (при объеме пробы 4 мл).

Набор хранить при температуре от 0 ºС до +8 ºС.

Принцип метода.

Этанол при действии алкогольоксидазы окисляется кислородом воздуха до ацетальдегида и перекиси водорода. Последний в супряжений пероксидазний реакции окисляет хромоген до цветного продукта, который определяется фотометрично:

алкоголь-

СН3СН2ОН + О2 оксидаза СН3СНО + Н2О2

ЅН2+ Н2О2 пероксидаза S + 2Н2О

краситель

Реактивы.

1. "Хромоген". Сухая смесь хромогену с составляющими фосфатного буфера (2,45 г).

2. "Ферменты". Стабилизированная суспензия алкогольоксидазы и пероксидазы в сульфати аммония.

3. "Стандарт". Калибровочный раствор этанола,10 г/л (стабилизированный).

4. "Осаджувач".40%-ный раствор трихлоруксусной кислоты (10 мл).

Дополнительный реактив: 0,8 М НСИ (концентрированную соляную кислоту разводят в 15 раз водой: 10 мл кислоты + 140 мл воды).

Допустимые величины содержания алкоголя в биологических жидкостях человека.

Сыворотка, плазма и цельная кровь - до 0,25 г/л (пороговая норма).

Превышение величины 1 г/л принимается как юридическое доказательство алкогольного опьянения.

Видтворювальнисть (коэффициент вариации) – (5-7)% (в зависимости от диапазона концентраций).

Линейность калибровочной кривой к концентрации алкоголя 4,5 г/л в исходной пробе (до 45 мкг спирта в фотометрованому растворе), что соответствует оптической плотности до 1,0 - 1,3.

Приготовление рабочего реагента.

1. "Хромоген". Содержимое флакона 1 поместить в термостойкий стакан или колбу на 0,5 л, добавить 350 мл дистиллированной воды и нагреть смесь до полного растворения. Перед использованием раствор охладить до комнатной температуры.

Хранить раствор в герметично закрытой посуде при температуре от +8 ºС до +20 ºС в затемненном месте до 2-х недель.

2. "Реагент". В день анализа поместить збовтану суспензию ферментов из флакона 2 в приведен до комнатной температуры раствор хромогену и смесь хорошо размешать.

Реагент используют в день приготовления.

Примечание: При проведении меньшего числа анализов готовят соответствующее количество реагента, смешивая раствор хромогену и збовтану суспензию ферментов в соотношении 700: 1, а именно:

Vxp = 3,5·N (мл); Vе = 0,5 N/100 (мл);

где Vxp - объем раствора хромогену, мл;

Vе - объем суспензии ферментов, мл;

0,5 - паспортный объем суспензии ферментов, мл;

N - число анализов (включая слепую и калибровочную пробы).

3. "Стандарт". Развести стандартный раствор этанола в 10 раз водой (0,1 мл + 0,9 мл Н2О).

Раствор используют в день приготовления как калибрант с концентрацией 1 г/л.

П р и м и т к а: Все операции со спиртом следует проводить очень тщательно, предотвращая случайное попадание его в реагенты.

4. "Осаджувач". Содержимое флакона 4 (10 мл 40% ТХО) развести в 10 раз водой (добавить 90 мл Н2О).

П р и м и т к а: "Осаджувач" является концентрированным раствором сильной кислоты, поэтому при работе с ним необходимо соблюдать соответствующие правила техники безопасности.

Проведение анализа.

Длина волны - 450 нм (спекрофотометр или фотоколориметр).

Кюветы 1 см.

Температура инкубации - комнатная (около 20 ºС).

Подготовка проб крови (сыворотки или плазмы).

В небольшие стеклянные пробирки вносят по 0,1 мл проб только что взятой крови (для дезинфекции используют водный раствор риванолу), добавляют по 0,9 мл разведенного (4%) раствора "осадителя" и встряхивают. Пробы выдерживают при комнатной температуре 5 мин и центрифугируют для осаждения белков при 3000 об/мин в течение 10 мин. Для анализа используют надосадочную жидкость.

Аналогично обрабатывают слепую и калибрувальу пробы.

Раствор.

Исследовательская проба

Калибровочная проба

Слепая проба

4%-ный осаджувач, мл

0,9

0,9

0,9

Кровь (сыворотка или плазма), мл

0,1

-

-

Калибровочный раствор этанола (1 г/л), мл

-

0,1

-

Вода, мл

-

-

0,1

Анализ проводят серийно по 20-30 исследовательских проб с постановкой в каждой серии калибровочной и слепой проб по такой схеме:

Раствор.

Исследовательская проба

Калибровочная проба

Слепая проба

Надосадочная жидкость (соответствующая для каждой пробы), мл

0,1

0,1

0,1

Рабочий реагент, мл

3,5

3,5

3,5

Реакцию запускают добавлением рабочего реагента в точно фиксированное время с интервалом, например, в 30 с между пробами.

Останавливают реакцию через 20 мин добавлением к всех проб по 0,5 мл 0,8 М НСИ в той же временной последовательности, которая витримувалась при внесении рабочего реагента.

Пробы фотометрують при 450 нм против слепой. Реакционная смесь перед добавлением кислоты имеет голубой окрас, который в кислой среде переходит в желтое.

Расчет концентрации алкоголя (в г/л или промилле ° /00) в каждой серии проводят по своей калибрувальною пробоя согласно формуле:

С = Эд/Еккл

где Эд и Екл - оптические плотности опытной и калибровочной проб соответственно, измеренные против слепой пробы.

ПРИМЕЧАНИЯ. 1. Время инкубации можно менять (10-25 мин) но соблюдение одинакового времени для всех проб является обязательным.

2. При определении алкоголя в моче операцию осаждения белков опускают и при анализе используют 0,02 мл мочи, а в калибровочной пробе – 0,02 мл раствора этанола с концентрацией 1 г/л.

Время инкубации - 10 минут. Формула расчета такая же, как приведена выше.

3. Для сыворотки крови (но не цельной крови) допустимо проводить экспресс-анализ и без осаждения белков. Для этого используют 0,02 мл сыворотки, а в калибровочной пробе – 0,02 мл раствора этанола с концентрацией 1 г/л. Время инкубации - 10 минут. Формула расчета не меняется. Погрешность при анализе алкоголя несколько возрастает, однако для экспрессного выявления алкогольного опьянения (С>1 г/л) такой вариант допустим.

4. При проведении анализа недопустимо наличие в лаборатории паров метанола, этанола, других спиртов и летучих окисляющих и восстанавливающих агентов.

5. При наличии в лаборатории фотоэлектроколориметра с уменьшенным объемом фотометрованих проб (0,5 – 1,0 мл), например, "Мефан-8001", можно пропорционально уменьшить дозу реагентов на всех этапах определения.

6. Алкогольоксидаза специфическая как этанола, так и метанола (причем последний окисляется в 10 раз эффективнее), поэтому в особых случаях для обнаружения метилового спирта следует провести газо-жидкостную хроматографию.

Срок хранения. 6 месяцев.

Ключевые слова: алкотест инструкция, алкотест применение, алкотест состав, алкотест отзывы, алкотест аналоги, алкотест дозировка, лекарство алкотест, алкотест цена, алкотест инструкция по применению.

Дата публикации: 28.03.17