АЛКОТЕСТ
для медицинского применения
АЛКОТЕСТ набор реактивов
Назначение.
Набор используется для количественного анализа этанола в биологических жидкостях (цельной крови, плазме, сыворотке, слюне и моче) и предназначен для использования в клинико-диагностической и научно-исследовательской практике, а также судмедэкспертизе в качестве средства первичного скрининга проб.
Набор пригоден для определения этанола в лекарственных препаратах, пищевых продуктах и бродильных средах.
Набор рассчитан на 100 анализов (при объеме пробы 4 мл).
Набор хранить при температуре от 0 ºС до +8 ºС.
Принцип метода.
Этанол при действии алкогольоксидазы окисляется кислородом воздуха до ацетальдегида и перекиси водорода. Последний в супряжений пероксидазний реакции окисляет хромоген до цветного продукта, который определяется фотометрично:
алкоголь-
СН3СН2ОН + О2 оксидаза СН3СНО + Н2О2
ЅН2+ Н2О2 пероксидаза S + 2Н2О
краситель
Реактивы.
1. "Хромоген". Сухая смесь хромогену с составляющими фосфатного буфера (2,45 г).
2. "Ферменты". Стабилизированная суспензия алкогольоксидазы и пероксидазы в сульфати аммония.
3. "Стандарт". Калибровочный раствор этанола,10 г/л (стабилизированный).
4. "Осаджувач".40%-ный раствор трихлоруксусной кислоты (10 мл).
Дополнительный реактив: 0,8 М НСИ (концентрированную соляную кислоту разводят в 15 раз водой: 10 мл кислоты + 140 мл воды).
Допустимые величины содержания алкоголя в биологических жидкостях человека.
Сыворотка, плазма и цельная кровь - до 0,25 г/л (пороговая норма).
Превышение величины 1 г/л принимается как юридическое доказательство алкогольного опьянения.
Видтворювальнисть (коэффициент вариации) – (5-7)% (в зависимости от диапазона концентраций).
Линейность калибровочной кривой к концентрации алкоголя 4,5 г/л в исходной пробе (до 45 мкг спирта в фотометрованому растворе), что соответствует оптической плотности до 1,0 - 1,3.
Приготовление рабочего реагента.
1. "Хромоген". Содержимое флакона 1 поместить в термостойкий стакан или колбу на 0,5 л, добавить 350 мл дистиллированной воды и нагреть смесь до полного растворения. Перед использованием раствор охладить до комнатной температуры.
Хранить раствор в герметично закрытой посуде при температуре от +8 ºС до +20 ºС в затемненном месте до 2-х недель.
2. "Реагент". В день анализа поместить збовтану суспензию ферментов из флакона 2 в приведен до комнатной температуры раствор хромогену и смесь хорошо размешать.
Реагент используют в день приготовления.
Примечание: При проведении меньшего числа анализов готовят соответствующее количество реагента, смешивая раствор хромогену и збовтану суспензию ферментов в соотношении 700: 1, а именно:
Vxp = 3,5·N (мл); Vе = 0,5 N/100 (мл);
где Vxp - объем раствора хромогену, мл;
Vе - объем суспензии ферментов, мл;
0,5 - паспортный объем суспензии ферментов, мл;
N - число анализов (включая слепую и калибровочную пробы).
3. "Стандарт". Развести стандартный раствор этанола в 10 раз водой (0,1 мл + 0,9 мл Н2О).
Раствор используют в день приготовления как калибрант с концентрацией 1 г/л.
П р и м и т к а: Все операции со спиртом следует проводить очень тщательно, предотвращая случайное попадание его в реагенты.
4. "Осаджувач". Содержимое флакона 4 (10 мл 40% ТХО) развести в 10 раз водой (добавить 90 мл Н2О).
П р и м и т к а: "Осаджувач" является концентрированным раствором сильной кислоты, поэтому при работе с ним необходимо соблюдать соответствующие правила техники безопасности.
Проведение анализа.
Длина волны - 450 нм (спекрофотометр или фотоколориметр).
Кюветы 1 см.
Температура инкубации - комнатная (около 20 ºС).
Подготовка проб крови (сыворотки или плазмы).
В небольшие стеклянные пробирки вносят по 0,1 мл проб только что взятой крови (для дезинфекции используют водный раствор риванолу), добавляют по 0,9 мл разведенного (4%) раствора "осадителя" и встряхивают. Пробы выдерживают при комнатной температуре 5 мин и центрифугируют для осаждения белков при 3000 об/мин в течение 10 мин. Для анализа используют надосадочную жидкость.
Аналогично обрабатывают слепую и калибрувальу пробы.
Раствор.
Исследовательская проба
Калибровочная проба
Слепая проба
4%-ный осаджувач, мл
0,9
0,9
0,9
Кровь (сыворотка или плазма), мл
0,1
-
-
Калибровочный раствор этанола (1 г/л), мл
-
0,1
-
Вода, мл
-
-
0,1
Анализ проводят серийно по 20-30 исследовательских проб с постановкой в каждой серии калибровочной и слепой проб по такой схеме:
Раствор.
Исследовательская проба
Калибровочная проба
Слепая проба
Надосадочная жидкость (соответствующая для каждой пробы), мл
0,1
0,1
0,1
Рабочий реагент, мл
3,5
3,5
3,5
Реакцию запускают добавлением рабочего реагента в точно фиксированное время с интервалом, например, в 30 с между пробами.
Останавливают реакцию через 20 мин добавлением к всех проб по 0,5 мл 0,8 М НСИ в той же временной последовательности, которая витримувалась при внесении рабочего реагента.
Пробы фотометрують при 450 нм против слепой. Реакционная смесь перед добавлением кислоты имеет голубой окрас, который в кислой среде переходит в желтое.
Расчет концентрации алкоголя (в г/л или промилле ° /00) в каждой серии проводят по своей калибрувальною пробоя согласно формуле:
С = Эд/Еккл
где Эд и Екл - оптические плотности опытной и калибровочной проб соответственно, измеренные против слепой пробы.
ПРИМЕЧАНИЯ. 1. Время инкубации можно менять (10-25 мин) но соблюдение одинакового времени для всех проб является обязательным.
2. При определении алкоголя в моче операцию осаждения белков опускают и при анализе используют 0,02 мл мочи, а в калибровочной пробе – 0,02 мл раствора этанола с концентрацией 1 г/л.
Время инкубации - 10 минут. Формула расчета такая же, как приведена выше.
3. Для сыворотки крови (но не цельной крови) допустимо проводить экспресс-анализ и без осаждения белков. Для этого используют 0,02 мл сыворотки, а в калибровочной пробе – 0,02 мл раствора этанола с концентрацией 1 г/л. Время инкубации - 10 минут. Формула расчета не меняется. Погрешность при анализе алкоголя несколько возрастает, однако для экспрессного выявления алкогольного опьянения (С>1 г/л) такой вариант допустим.
4. При проведении анализа недопустимо наличие в лаборатории паров метанола, этанола, других спиртов и летучих окисляющих и восстанавливающих агентов.
5. При наличии в лаборатории фотоэлектроколориметра с уменьшенным объемом фотометрованих проб (0,5 – 1,0 мл), например, "Мефан-8001", можно пропорционально уменьшить дозу реагентов на всех этапах определения.
6. Алкогольоксидаза специфическая как этанола, так и метанола (причем последний окисляется в 10 раз эффективнее), поэтому в особых случаях для обнаружения метилового спирта следует провести газо-жидкостную хроматографию.
Срок хранения. 6 месяцев.
Ключевые слова: алкотест инструкция, алкотест применение, алкотест состав, алкотест отзывы, алкотест аналоги, алкотест дозировка, лекарство алкотест, алкотест цена, алкотест инструкция по применению.
